Exoma Screening - WES

Prueba caracterizada por la secuenciación de exones que se lleva a cabo, para lo cual se requiere una muestra de sangre en la cual se aplica la prueba.

El ADN se enriquece mediante el kit de exon humano SureSelect de Agilent (CA) para el sistema de secuenciación SOLid. El enfoque va dirigido a los exones de 18.000 genes conocidos lo cual cubre 38 Mb del genoma humano; cada muestra se secuencia en 1/4 del cuadrante SOLid 4 y se obtiene 3.1 de 2.2 Gb de secuencia mapeable, las lecturas fueron dadas por los espacio de colores que se formaban los cuales se asignaron al genoma humano de referencia (NCBI GRCh37.2) y a variantes (ambos SNPs e indeles) que fueron llamados utilizando el software CLCbio Genomics Workbench.

Estudio realizado a un grupo de personas con cierto grado de consaguinidad que presentaban mutaciones en los genes implicados, donde se determino una delección de una base en el exón 1 de SPINK1 (c.27delC) 

Bibliografía

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1.	Jessica LaRusch PMMB. PubMed. [Online].; 2012 [cited 2017 Mayo 28. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3651649/pdf/nihms-469306.pdf.

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Prueba de PCR

PCR - REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA

Es una prueba utilizada para identificar delecciones y/o duplicaciones en regiones del ADN. ademas se incluye una prueba de NGS (Secuenciación de Próxima Generación) de PRSS1, SPINK1, CTRC y CFTR.

El gADN se aisla de una muestra del paciente mediante un kit estandarizado y cuantificado y consiste en la secuencia de enriquecimiento de los exones de codificación específica y nucleótidos intrónicos adyacentes que se lleva a cabo por una metodología cebo de captura usando sondas de oligonucleótidos largo biotinilados.

Este procedimiento es seguido por PCR que puede ser --> PRC cuantitativo o PCR  de largo alcance que luego se complementa con NGS; adicional se realiza la Secuenciacion de Sanger que se lleva a cabo para la detección una variante heterocigota fiable.

Bibliografía

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1.	Sheila Solomon MCDCW,MPyJL,P. PubMed. [Online].; 2012 [cited 2017 Mayo 21. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK84399/.
2.	AmbryGenetics. AmbryGenetics. [Online].; 2017 [cited 2017 Mayo 21. Available from: http://www.ambrygen.com/tests/pancreatitis-testing.

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Prueba de Tamizaje y Confirmatoria

Prueba de Tamizaje

- Prueba de Secretina-Colecistoquinina o Secretina-Ceruleína (PSC)

Prueba invasiva que consiste en la estimulación del páncreas mediante la adminstración intravenosa de secretina, colecistoquinina o ceruleína; para lo cual luego se obtendrán muestras del liquido duodenal. La presencia de bicarbonato es el mejor criterio que permite diferenciar entre pacientes con o sin enfermedad pancreática puesto que se toma en cuenta la disminución en la concentración del mismo o la producción de enzimas.

Prueba Confirmatoria

- Prueba del Sudor

Representa una forma indirecta de evaluar la función de CFTR que estima la concentración de Cloro en el sudor en donde se considera:

Patológica (Cl > 60 mmol/l) 

Borderline (Cl 40-60 mmol/l) 

Normal (Cl < 40 mmol/l)

 

Bibliografía

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1.	Carballo F, Sanz-de-Villalobos E. Research Gate. [Online].; 2014 [cited 2017 Mayo 14. Available from: https://www.researchgate.net/profile/Eduardo_Sanz-de-Villalobos/publication/242125131_PRUEBAS_DE_FUNCION_PANCREATICA_EXOCRINA/links/0deec52c72d3973373000000/PRUEBAS-DE-FUNCION-PANCREATICA-EXOCRINA.pdf.
2.	ECV R. Elsevier. [Online].; 2012 [cited 2017 Abril 30. Available from: http://www.elsevier.es/es-revista-gastroenterologia-hepatologia-14-articulo-pancreatitis-cronica-mas-alla-del-S0210570512001082.

Alteraciones de la Epigenética

Uno de los factores que intervienen es el estrés oxidativo, al cual las células acinares se adaptan puesto que las mismas tienen cierto grado de sensibilidad por las mutaciones involucradas; dicha adaptación puede implicar el estado de diferenciación y la reprogramación epigenética de las mismas. Cabe destacar que el alcohol puede ser un factor que contribuye al estrés oxidativo por el agotamiento de “carroñeros” como el selenio, vitaminas E y C a más de la riboflavina; dicho agotamiento va a estar involucrado en la inducción y/o propagación del daño, a más de la acumulación de lípidos que dañan la célula acinosa como resultado de la acción de sus metabolitos tóxicos.

Curiosamente, la reprogramación epigenética del genoma de la célula acinar puede preceder, y en realidad acentuar la lesión asociada a la pancreatitis. Según estudios realizados esta incide en la activación de genes que promueven, en lugar de impedir la lesión.

Bibliografía

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1.	Fernandez-Barrena MG. Sceince Direct. [Online].; 2016 [cited 2017 Mayo 07. Available from: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128023891000204.
2.	Klaus E. Mönkemüller PM. Sceince Direct. [Online].; 2017 [cited 2017 Mayo 07. Available from: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780323340625000571.

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